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一、PCR擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)問(wèn)題

從行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)講，PCR擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室需要設(shè)計(jì)布局四大區(qū)域，且這四大區(qū)域不能挨著，要相對(duì)獨(dú)立，處于分隔狀態(tài)，包括空氣都不能相通。但根據(jù)使用儀器的不同功能，有些區(qū)域可以適當(dāng)合并。

一區(qū)域：試劑存儲(chǔ)和準(zhǔn)備區(qū)域

該區(qū)域主要用于貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備，以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。

二區(qū)域：標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要用于核酸提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對(duì)于接觸臨床樣本實(shí)操，要滿(mǎn)足生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范、防護(hù)設(shè)備、個(gè)人防護(hù)要求。

三區(qū)域：擴(kuò)增區(qū)

該區(qū)域主要用于核酸合成、擴(kuò)增、檢測(cè)。

四區(qū)域：擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要用于擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測(cè)定。

二、PCR擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室氣流問(wèn)題

PCR擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室空氣流向要按照試劑存儲(chǔ)和準(zhǔn)備區(qū)流向標(biāo)本制備區(qū)，再流向擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，為了防止擴(kuò)增產(chǎn)物從空氣氣流流入擴(kuò)增前的區(qū)域，也可以按照試劑存儲(chǔ)和準(zhǔn)備區(qū)流向標(biāo)準(zhǔn)制備區(qū)，再流向擴(kuò)增區(qū)和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)這個(gè)方向，空氣氣壓遞減的方式進(jìn)行。

三、PCR擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人流物流問(wèn)題

1）、試劑存儲(chǔ)和準(zhǔn)備區(qū)。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運(yùn)送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過(guò)擴(kuò)增檢測(cè)區(qū)，試劑盒中的陽(yáng)性對(duì)照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。

2)、標(biāo)本制備區(qū)。針對(duì)有可能會(huì)發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過(guò)在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染，加入待測(cè)核酸后，必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對(duì)具有潛在傳染危險(xiǎn)性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開(kāi)蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。

3）、擴(kuò)增區(qū)。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動(dòng)。必須注意的是，所有經(jīng)過(guò)檢測(cè)的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開(kāi)。

4）、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣，如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法、直接或酶切后瓊 脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、核酸測(cè)序方法、質(zhì)譜分析等。